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鼠抗和兔抗的Capto MMC混合方式也层析

2025-10-26 12:15:50

MC提纯HEK CM想得到的,分之一有5mg抗病毒,可用50mM Tris pH 7.5挥发5倍。同时可用50mM Tris pH 7.5抵消1mL 烷基硫化物层析柱子。将仪器上样后,可用pH 7.5的50mM Tris和0.3M 矿石顺利进行差分开脱转化的肽。结果如图7附注,在FT之中观察到少量秽肽,基本上仓鼠抗病毒被开脱到E2,E3和E4之中,总回收率之比80%。

3.2兔子抗病毒

兔子抗病毒在HEK CM之中表达,SDS-PAGE得出论点是由两条偷偷地组成的,如图8附注,对此现象译者给出的阐释是由于肽键变形,线粒体或二硫键造成的。将HEK CM直接上样到pH 7.0的20 mM矿石的Capto MMC之中,结果未曾与很薄转化。将1M甲醛投身于到CM之中时,至少一部分免疫与很薄转化。将Capto MMC用20mM 柠檬酸钠pH 5.2顺利进行抵消,将CM用0.1M 柠檬酸钠pH 3.8滴定至pH 6.0。在这种前提条件下,无法兔子的抗病毒流过穿。但是很低pH的CM也时会增加秽肽的转化。可用pH 7.0的20mM矿石对层析柱子顺利进行淋洗,但未开脱兔子抗病毒。之后译者可用20mM 矿石悬浮液与0-100% 0.3M NaCl顺利进行差分开脱。结果如图8附注,E1,E2之中开脱了基本上兔子的抗病毒,之后0.5M NaCl和1M 其时会也时会开脱许多秽肽。

将E1-E3在pH 7.5的Tris之中顺利进行烷基硫化物层析精纯。但是当挥发五倍时,时会有一部分兔子的抗病毒流过穿层析柱子,当挥发十倍时也时会有相同的流过穿肽的值。结果如图9附注。

论点

译者得出结论Capto MMC可以用做猎捕提纯仓鼠和兔子的抗病毒。译者认为开脱前提条件优化只能针对不同的免疫类型。在精纯步骤之中,烷基硫化物对仓鼠的抗病毒有效地。

编者认为,译者的悬浮液法制分析方法不够年初,应该多可用几种悬浮液法制顺利进行优化,同时对于探测全面性SDS-PAGE结果说明不够年初,甜度收率等全面性无法有力的数据集大力支持。但是至少可以为我们提纯仓鼠源抗病毒获取思路。

原文来源:

Arakawa T, Kurosawa Y, Storms M, Maruyama T, Okumura CJ, Kita Y. Capto MMC mixed-mode chromatography of murine and rabbit antibodies. Protein expression and purification. 2016;127:105-10.

Alliance Protein Laboratories, Abwiz Bio

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